最近我跑PCR,两对引物,第一对,一跑就出了目标条带,第二对跑了很多次,死活跑不出东西来。大家帮我分析下,问题可能出在哪里?
引物设计没问题,很多人都用这对引物。我按照文献的各种方法都跑了,渐变温的,恒温的。开始怀疑引物出问题了,放了很长时间了,但这两天又用新配的引物也还是跑不出来。我也试着改变DNA模板浓度跑了,也没跑出任何东西来。
老板告诉我的信息是,肯定能跑出来,我们试验室毕业了的人跑过,再就是确实不好跑出来,第一对引物比较好跑出来,第一对跑出来了但第二对引物不一定能跑出来。他的意思是不是DNA模板可能有问题?纯度不够?
大家帮我分析下,我的实验过程中可能哪些地方出了问题,该怎么解决这些问题,谢谢了
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这是第二对引物跑的,跑出应该是同第一对的差不多,都应该是300多bp的片段
另外弱弱的问一下,最下面那条带是什么?引物?引物二聚体?