最近我跑PCR，两对引物，第一对，一跑就出了目标条带，第二对跑了很多次，死活跑不出东西来。大家帮我分析下，问题可能出在哪里？
引物设计没问题，很多人都用这对引物。我按照文献的各种方法都跑了，渐变温的，恒温的。开始怀疑引物出问题了，放了很长时间了，但这两天又用新配的引物也还是跑不出来。我也试着改变DNA模板浓度跑了，也没跑出任何东西来。
老板告诉我的信息是，肯定能跑出来，我们试验室毕业了的人跑过，再就是确实不好跑出来，第一对引物比较好跑出来，第一对跑出来了但第二对引物不一定能跑出来。他的意思是不是DNA模板可能有问题？纯度不够？
大家帮我分析下，我的实验过程中可能哪些地方出了问题，该怎么解决这些问题，谢谢了



这是第二对引物跑的，跑出应该是同第一对的差不多，都应该是300多bp的片段
另外弱弱的问一下，最下面那条带是什么？引物？引物二聚体？