在使用FMOC-Cl分析血浆中colistin药物的时候遇到FMOC-Cl衍生化试剂的问题。
本身使用perkin elmer HPLC系统搭配FL detector,C18 column,mobile phase使用ACN:THF:H2O=87:4:13,流速1ml/min,萤光Ex:260nm Em:315nm。
衍生化试剂FMOC-Cl本身具有萤光且易潮解产生FMOC-OH,当配制FMOC-Cl 100mM溶於ACN内打入HPLC时图谱有许多干扰峰,如图
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就自我认知上peak可能有一FMOC-Cl再加上FMOC-OH两者,但结果却有好多peak产生,重复配制数次结果皆相同,这是正常的现象吗?这样的情况不知道有没有办法避免?15分钟前的梯型peak有办法去除掉吗?干扰太多没有办法进行下一步的分析样品。希望能赶快解决单纯将FMOC-Cl打入HPLC却产生许多peak的问题,麻烦给我指导,让我有一絲曙光吧!
10/25
感谢大家的回复,首先在FMOC-Cl方面已购置新的FMOC-Cl(sigma),并且也有分装至多个样品瓶保存,於秤药时皆拿取少量之样品瓶为优先,起初也是怀疑FMOC-Cl不纯与损耗而购置新的试剂,对於量的比对如下图所示分别为1nM与100pM
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先感谢大家费尽心思与时间的解答。请多多指教!还是希望可以赶紧解决