首先奉上作业指导书！，希望可以尽快排出照片，因为最近比较忙，拍照片需要比较多的时间。

1 定义
细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后，所生长的细菌菌落的总数。
此法主要作为判定饮用水、水源水、地表水等污染程度的标志。
2参考标准
《水和废水监测分析方法》﹙第四版增补版﹚ 水中细菌总数的测定
3 仪器设备
3.1 LDZX-40SBI型高压灭菌锅
3.2 LI20-2型恒温培养箱
3.3 SW-CJ-1FD型净化工作台
3.4 酒精灯
3.5 9cm培养皿
3.6 250ml/500ml锥形瓶
3.7 其它常用玻璃仪器设备
4 试剂
4.1 无水乙醇，AR
4.2 营养琼脂培养基
5 实验准备
5.1 培养基的配制和灭菌
5.1.1 称取33g营养琼脂培养基于大烧杯中，用超纯水定容至1L（可比预定的体积多加20ml左右的超纯水，以免超纯水形成水蒸汽造成体积损失），搅匀后于电热板上边搅拌边加热至沸。其配制用量可依据样品数量适当增减。
5.1.2 将培养基分装至锥形瓶中，每瓶约容量的三分之二左右(不可太多)，瓶口包上报纸并用棉线扎紧。
5.1.3 将装好培养基的锥形瓶放入高压灭菌锅中，121℃下灭菌15min。
5.2 玻璃仪器及无菌水的灭菌
5.2.1 将要使用的10ml移液管，100ml量筒、1ml移液枪枪头、培养皿等用报纸按规定包好；
5.2.2 于1L密塞玻璃瓶中加入适量纯水，盖紧瓶盖。于数个（依据稀释度确定用量）100ml带盖玻璃瓶中加适量玻璃珠，盖上塞子，包上报纸并用棉绳扎紧。
5.2.3 将以上所有物品分层放入高压灭菌锅中，121℃下灭菌15min（可与培养基同时灭菌）。灭菌完后放气，待灭菌锅压力为零后取出所有物品，放入已灭菌处理的超净台中。
5.3 仪器和无菌环境准备
5.3.1 将培养箱接通电源，设定温度为37℃。
5.3.2 打开超净台和细菌分析室的紫外灯，灭菌半小时后关闭紫外灯，15min后才能进入分析室进行实验。
6 分析步骤（以所取稀释倍数为10-1、10-2、10-3为例）
6.1 选择稀释度
选择合适的稀释度，以平皿上的菌落总数介于30～300之间。一般的地表水稀释度为：10-1、10-2、10-3；大多数生活饮用水未经稀释直接接种1ml所得的细菌总数适于计算。
6.2 水样稀释
6.2.1 将水样用力振摇20～30次，使细菌凝团分散。
6.2.2 实验进行前喷洒适量75%酒精于超净台内，双手也要喷洒适量并擦拭均匀，进行灭菌处理。
6.2.3点燃酒精灯，以无菌操作分别量取90ml冷却的无菌水于3个100ml已灭菌的玻璃瓶中，吸取10ml充分混合的水样注入1号玻璃瓶，混匀成1﹕10稀释液。另取一支移液管移取10ml1﹕10稀释液注入2号玻璃瓶，混匀成1﹕100稀释液。以同样步骤稀释，得到1﹕1000稀释液。每个样品应做个稀释度的稀释液。
水样稀释操作如下图：


6.3 接种和培养
6.3.1 将培养基从灭菌锅中取出放入超净台，插上温度计，待温度接近50℃时即可开始接种。
6.3.2 以无菌操作用移液抢移取1ml1﹕10稀释液注入平皿，倒入约15ml冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，顺时针旋摇平皿几圈，使水样与培养基充分混匀。于皿盖上编号。每个稀释度的水样做两个平行。另取2个平皿只倾注营养琼脂培养基，做空白对照。
6.3.3 待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，底面朝上，置于37℃恒温培养箱内培养24h，计数菌落。
6.4 计数菌落
计数个平皿的菌落数，求出同稀释度的平均菌落数。
7 计算和数据报告
细菌总数以每平皿菌落的总数或平均数乘以稀释倍数得来，其计算分为以下4种情况：
7.1 平均菌落数在30～300之间：只有一个稀释度符合此范围时以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告数据；若有两个稀释度在此范围，则以分别计算细菌总数值，用偏大值除以偏小值，比值小于2时报两者的平均值，比值大于2时报较小值
7.2 所有稀释度的平均菌落数均大于300：以稀释倍数最大的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
7.3 所有稀释度的平均菌落数均小于30：以稀释倍数最小的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
7.2 所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间：以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
报告方式：
菌落数在100以内按是有数据报告；大于100时，采用2为有效数字以10的指数表示；报告菌落数为无法计数时应注明水样的稀释度。
7 注意事项
6.1 煮沸营养琼脂培养基时要边加热边搅拌，使得未溶解的培养基加速溶解，防止琼脂糊底引起烧瓶破裂。待培养基变得澄清即可停止加热。
6.2 使用的玻璃器皿灭菌前要按要求用报纸包好，密封，没有缝隙。
6.3 将要灭菌的物品放入高压灭菌锅，设定好温度和灭菌时间后在放气阀打开状态下加热，排除锅内冷空气，待温度升到设定值时关上放气阀。
6.4 灭菌结束后待气体放完，压力为零时才可打开高压锅锅盖取出物品。
6.5 接种操作应在酒精灯火焰15cm内进行。
6.6 吸取不同浓度的稀释液时必须更换吸管。

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楼主可以在这里看看相关操作