各位大侠你们好,前端时间我做实验时候出现一个很奇怪的问题,希望大家帮我解答!
    我用HPLC梯度洗脱测量咖啡酸和阿魏酸的标样(标准的保留时间为8.815min,14.598min).同一浓度里连续进四针样,咖啡酸的保留时间依次为8.682,6.165,3.715,8.665.阿魏酸的保留时间为14.198,13.798,13.123,14.198.这是在同一浓度,同一个瓶子里面取的,只是加样时间温度,流速,压力都没有多大变化,你说怎么保留时间就变化那么大呢?这时候的面积差异不大,相关性不错!R2=0.999.由于碰到这个情况,不清楚:就请教他人,有人说是溶剂问题,有人说是温度问题,有人说是缓冲液问题,有人说是样品问题.
    我就一一排查
    针对溶剂问题,说有气泡,没混合均匀.我就超声波超30MIN.效果可以说当天的还行,保留时间真的变的接近拉,可是第二天保留时间照样相差较大.
    针对温度问题,我是没办法解决.只有早来点把空调开上,让其工作一段时间后再开始跑基线,跑空白,进样.
    针对缓冲液问题,我需要的是PH=5.4的乙酸缓冲液,之前我用的是乙酸和乙酸铵,后来怕乙酸铵分解,就换成乙酸钠,结果也好了一天,可是峰型直接变拉!有矮胖的变成瘦高的.我说是由于流动相问题,无所谓,只要峰重复性好就行.准备第两天大干一场.可是呢,第一针直接没出峰,后来的峰直接梯度洗脱时间外出来,且峰型比较差.
  说到样品的问题,我看文献说阿魏酸见光易分解,就换用棕色瓶配,结果出来就只有一个峰拉,而且面积也不成比例拉!
  你们说说怎么测一个样品,怎么变化系数那么大!一天一个模样,而且尤其是保留时间,怎么变化如此巨大!
    我还是一个新手阿,不要那么打击我阿!我现在都被这实验打击疯拉,忘各位大侠帮忙,避免我成为精神病人拉!