回复brant8发表于：2009/8/19 20:30:30悬赏金额：
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我用的是安捷伦高效液相1100，主要在用于做血药浓度测定。
其中一根色谱柱，TC-C18，4.6*250mm，5um，用于测定血浆中甲氨蝶呤浓度。流动相用的是甲醇：磷酸缓冲盐（PH=5.41）=21：79。
之前有停了将近两个月没有做，运作也是正常的。
可是上次洗完系统后，做这根柱子时，压力由原来的140bar左右骤升至310bar左右，由于是马上出结果，所以只好硬着头皮做下去，但峰形没有变化，出峰时间稍有滞后1~2min。
系统压力绝对没有问题，做别的柱子正常。
打电话给客服，让我脱检测器，反向冲柱子，先用水冲了25ml，后用异丙醇0.5ml/min，2h，155bar，但正向冲甲醇5%、水95%、0.2ml/min时压力都非常高，而且都是以4~5bar的速度上升，可至300多bar，奇怪的是我将流速设为零后，压力还不降低，降低速度最多以1bar的速度降低，太反常了。
请问：我的柱子是不是堵了？如果是还有救吗？我在医院工作，液相水平太低，麻烦各位高手给我支支招！
判断是不是柱子的问题，你可以先拿掉柱子设流速，看压力，这个一般很低。
看你说的情况 柱子可能是堵了，低流速低有机相（5%的有机相，0.5左右的流速）先冲冲看，是否有改善，带缓冲盐的流动相一定要冲干净。处理柱子可能会花费多一些的时间。注意保养柱子。
luxw 回复于：2009/8/20 17:15:07
你用的都是高杂质的东西，血和盐。所以堵得可能很大！！！
按照1楼的说法可以试下看；然后，再继续反冲！！！
应该是柱子堵了，可能是磷酸盐的问题，使用之前应该过滤的，现在最好是用95％的水倒着冲洗一下看看。
还有可能是样品前处理不到位，可以试试用二氯甲烷等强极性溶剂洗一下柱子，注意洗的时候流动相用异丙醇做过渡，同时注意压力。
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