回复dickwang2008发表于：2009/7/15 22:29:09悬赏金额：
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已解决
前面几期活动中，我们就质谱参数、色谱柱使用、仪器维护等进行了相关的讨论，大家也发表了很多看法，版友反响良好。
本期活动的主题是“建立液质分析方法之感想”，即：我们在建立分析方法时，遇到了什么问题，怎样解决的，您对于使用液质建立方法有什么好的建议和方法……不妨写出来，与大家一起分享，共同交流。相信通过这个话题，大家能更好的提高分析方法建立的速度和效率，能够更好的学习总结彼此的经验和教训，为我所用，从而达到交流学习的目的。
说的太好了，深有体会。我们有时做的不同时间点的样本内标相差几倍。
顺便问一下，有时候同一样本测几次样本、内标的响应值相差也很大，可达几倍，但比值一般较好，不知道是什么原因？质谱API 3000
mcds 回复于：2009/7/22 15:35:22
我们建立液质方法一般是根据一些比较可靠的检测方法资料上提供的仪器方法（与我们配置类似），先试着在仪器上摸索，再根据我们检测目标物和仪器的响应情况适当改变，以适应我们检测的需要就可以了，这样比较省事，做起来简捷易行。
原文由 yangsophia 发表:
说说我们在建立方法时感触最深的几点：
1. 选择的离子对一定要稳定，质谱的参数要细细优化：尤其在选择用加合离子定量时，尤其要注意这一点，一般加合离子需要在一定的条件下（酸碱度、离子强度等）才能保持离子化程度一样，就响应一样。用对照品溶液测定时可能一致，可实际样品中要复杂的多，其他物质对离子化可能有影响。
2.确定待测物在柱上是否有保留：计算一下管路的死体积、柱的死体积之和，除以你的流速所得到的值，一定要小于你的待测物的出峰时间，最好差值在0.5min以上。因为液质不同液相，柱上没有保留在前面流出的物质喷雾时不稳定，会导致低浓度点、尤其定量下限附近同一样品响应不稳定。
我们在测得时遇到低浓度点的QC能相差双倍，怎么也不符合要求（80～120％），于是就将同一样品重复进样，发现重复性非常差，也是成倍的差异，于是就寻找原因，什么都试了就是不行，后来咨询了应用工程师，才怀疑是否有保留。于是，改变比例，推迟出峰，嘿，问题就解决了。
就此问题，浪费了我们一个多星期来找原因。
3. 样品的处理方法及内标的选择：
当测定复杂样品时，如生物样品血浆、胆汁、尿等，一定要考察在不同的实际样品中，内标、待测物是否能保持一致。
我们就遇到特别郁闷的事情，在空白血浆中内标提取后响应非常一致，线性及QC样品都很好，可加入不同时间点采得的血浆后，发现内标出现高低不平的现象，有时甚至相差1倍。可能为不同时间点的血浆中的背景物质、或pH等不一致、导致其在提取、离子化过程中存在差异。 |
说的很有道理！！
说说我们在建立方法时感触最深的几点：
1. 选择的离子对一定要稳定，质谱的参数要细细优化：尤其在选择用加合离子定量时，尤其要注意这一点，一般加合离子需要在一定的条件下（酸碱度、离子强度等）才能保持离子化程度一样，就响应一样。用对照品溶液测定时可能一致，可实际样品中要复杂的多，其他物质对离子化可能有影响。
2.确定待测物在柱上是否有保留：计算一下管路的死体积、柱的死体积之和，除以你的流速所得到的值，一定要小于你的待测物的出峰时间，最好差值在0.5min以上。因为液质不同
液相，柱上没有保留在前面流出的物质喷雾时不稳定，会导致低浓度点、尤其定量下限附近同一样品响应不稳定。
我们在测得时遇到低浓度点的QC能相差双倍，怎么也不符合要求（80～120％），于是就将同一样品重复进样，发现重复性非常差，也是成倍的差异，于是就寻找原因，什么都试了就是不行，后来咨询了应用工程师，才怀疑是否有保留。于是，改变比例，推迟出峰，嘿，问题就解决了。
就此问题，浪费了我们一个多星期来找原因。
3. 样品的处理方法及内标的选择：
当测定复杂样品时，如生物样品血浆、胆汁、尿等，一定要考察在不同的实际样品中，内标、待测物是否能保持一致。
我们就遇到特别郁闷的事情，在空白血浆中内标提取后响应非常一致，线性及QC样品都很好，可加入不同时间点采得的血浆后，发现内标出现高低不平的现象，有时甚至相差1倍。可能为不同时间点的血浆中的背景物质、或pH等不一致、导致其在提取、离子化过程中存在差异。
在使用液质建残留检测方法的时候，药物在进行质谱优化和色谱保留的问题都有遇到。我在试验过程中遇到有个药物出现了加和离子，不过在不同时间发现其并不是稳定的，可能是由于流动相或者管路中所带离子造成的，后来在保证离子强度的情况下选择了其准离子峰。同样是一个药物出现了不保留的情况，像这种情况是很头痛的要知道，因为试验无法往下开展了，并且如果说要更换不同类型色谱柱，需要选择、购买的周期是很长的，严重的影响到试验，最后是尝试了很多流动相组合在最终解决的，当然所耗的时间都是很常的，然后就是方法的前处理选择了，这个过程最为关键和重要，是方法研究的重点，所以多残留文献资料和进行方法尝试，结果比较是很重要的。
xiaolinzhang082 回复于：2009/7/30 17:53:02
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