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共有 20 人回复了该问答进了几针样,峰就几乎没了是怎么回事
 回复realtiger发表于:2009/3/10 19:16:40悬赏金额:20积分 状态:已解决
弱酸性化合物多残留检测
Agilent Zorbax C18 4.6*250 5um  0.9ml

时间    A%    B%    C%
0    80    10    10
10    20    40    40
14    10    45    45
16    4    48    48
18    80    10    10
流动相比例:A:水(0.2%冰醋酸)B:甲醇 C:乙腈

刚开始几针都很好


第二天变成这样的峰了




换了柱子agilent 4.6*150 3.5um的 0.8ml。这是第一针




后面的都成这样了


哪位帮忙分析下原因
1 柱子是不是有受损
4 第二个图峰形有点前伸那种,是怎么回事
2 怎么改善
3 分离度能否再提高,怎么改梯度
谢谢
03yx2 回复于:2009/3/11 22:53:33
原文由 realtiger 发表:
原文由 03yx2 发表:
从总体来看,峰的分离不好。所以条件尚待改善。

1、比较第一和第二的图谱,有两个差异,一个是峰高,一个是峰的种类。

不知道你第二天进针是不是进了2倍的体积,峰面积较高。从而含量比较小的物质成分也在图谱中表现出来了。这样峰比第一个就多了不少。如果进样量是一致的话,那就应该是柱子残留,即冲柱子的时间不够,建议不要倿嗇冲柱子的时间。一般用5%-10%的甲醇冲40min,再用有机相冲洗一个小时。如果残留比较严重可以小流速的再长时间冲洗下。

并没有进两倍体积,第一张图只是没有把后面的三个非目标物显示出来,现在我重新换了一张

2、换了一根柱子之后,第一针的图谱是比较标准的。分离度相比另一根柱子第一针稍微好了些。但是第二次的进样图谱完全变形了。但是看到你的峰高,好像进样量是前一针的一半,当你进样量减小,峰高必然降低,又由于你是梯度,存在漂移,这些原因就会使图谱很难看。建议在针与针之间增加柱子的平衡时间。等到柱子残留很低,再进第二针。

应该是换了柱子后比第一张要差啊

3、至于提高分离度。由于不能看到你的保留时间,只能大概的,建议初始有机相比例提高,在10-16分钟走一个等度,等你要的峰全部出来,再加大有机相知道纯有机相冲洗和平衡。

初始有机相比例再提高的话应该不利于分离啊


更换柱子后走的第一针不知道是因为没有完全走出来,还是其他原因,但是除了保留时间和峰面积的数据不知道外,单从图谱上看还可以。


提高有机相的比例不是要整个都提高,是提高最初始的比例,你的初始为10,可以提高到15-20,把前面的出峰时间缩短,对于成分较多的可以用等度试试。
nnsss 回复于:2009/3/11 11:11:20
柱子不适用你的色谱条件,QQ690547631
xiayun0530 回复于:2009/3/11 10:16:33
从同一根柱子的前后情况看样品好像有降解
从前后两根柱子情况看 后来的柱子柱效开始挺高的 峰高很高
从梯度设置来看 冲柱时间不够 有可能对柱子影响很大
doxw0323 回复于:2009/3/11 9:15:21
楼主说的还不详细,zorbax只是一个牌子,C18是个型号,具体是什么的柱子,是否适合做酸性比较大的物质分离,还要看柱子。
看图谱,基线有向上走的趋势,不是很稳。254nm,波长用的很普遍,不存在流动相干扰的问题。第一天和第二天相差都比较大了,柱校下降太快,真要考虑是否流动相的酸度不适合。
xulili_803011 回复于:2009/3/11 8:48:05
从前两张谱图看,我觉得是不是样品溶液的稳定性不好。
你的第三和第四张图我觉得也是这样的问题。
还有就是你两次用的柱子不一样,所以第一、二张图与第三、四张可比性不大。柱子填料的粒径不同,柱效差别很大。
我感觉还是溶液稳定性的问题,你应该坐一下稳定性实验看看
还有就是,你跑得是梯度,每次跑完一次以后,是否进行了posttime,这个参数一般设定5min,如果没有设定这一参数,也可以在每次进样结束后,在流动相初始条件下,平衡柱子5到10 min
 回复  1# realtiger  回复于:2009/3/10 19:18:42
进的是标样1ppm 乙腈溶液;换柱子后进样量由20改为10ul
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