生物碱测定
2.1 样品供试液的制备称取样品粉末(过80目筛)12.000 g,置于平底烧瓶中,加12 ml 10%NaOH溶液,静置15 min, 加50 ml醋酸乙酯(P>0.900),摇匀后放在80℃水浴中,保持回流。第1次回流2 h,第2次回流1 h,第3次回流1 h。将滤液合并,减压浓缩至干,用甲醇定容至25 ml,将此溶液过滤后,用移液枪精密吸取50 μl入10 ml容量瓶,用甲醇定容至10 ml备用。
2.2 波长扫描以甲醇为空白对照,将标准对照品溶液、样品供试液和空白对照液在200~700波长范围内进行扫描。结果显示前两者在(289±2) nm处有最大吸收值,且吸收峰相同,而空白对照液在289 nm处几乎没有吸收,故本实验选择289nm为测定波长。
2.3 稳定性实验室温下取40.8 μg/ml的对照品溶液,分别在1,2,3,4,5 h后,于289 nm处测定吸光度。结果5 h内稳定,RSD=0.64%。
2.4 标准曲线 精密称取加兰他敏对照品0.025 5 g,置于25 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得到1 020 μg/ml对照品溶液。精密量取对照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 ml入10 ml容量瓶,补甲醇至刻度。以甲醇为空白于289 nm下测定吸光度值。以取样量为横坐标,吸光度值为纵坐标,计算得回归方程Y=0.008 4X-0.022 7,r=0.999 9(n=5),加兰他敏在20.4~102 μg/ml浓度范围内与吸光度值呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验取5份标准对照液0.5 ml,照2.4测定方法制备标准品供试液和空白对照液,在289 nm波长处测定吸光度值,RSD为0.51%,表明精密度较好。