回复xky0230699发表于:2008/12/9 10:25:36悬赏金额:
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建立一个液相色谱方法时,比如有一个标准曲线的浓度区间为一个数量级,即最高浓度是最低浓度的10倍,此时若想改用外标法,那取哪个浓度比较合适,峰面积是6位数好,还是7位数好。在药典中常常没有对仪器的灵敏度作出规定,那么同一个浓度,在不同的仪器上就可能出现峰面积相差好几倍的情况。
一般还是选择相应与标曲的中间浓度点相近的那个浓度吧。
但是因为是不同的物质,提取率啊什么的与样品总会有差别,能用外标法,就不要用内标。
原文由 xky0230699 发表: 建立一个液相色谱方法时,比如有一个标准曲线的浓度区间为一个数量级,即最高浓度是最低浓度的10倍,此时若想改用外标法,那取哪个浓度比较合适,峰面积是6位数好,还是7位数好。在药典中常常没有对仪器的灵敏度作出规定,那么同一个浓度,在不同的仪器上就可能出现峰面积相差好几倍的情况。
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这就是中国药典和国外药典的区别
个人认为峰面积多少不重要,只要在外标法的线性区间内,峰不平头,结果都应该是准确的
不同的检测器,它们的线性范围都不同的,比如ECD,它的线性范围就很小,只有1000左右,如果超出这个范围,偏差就会比较大,还有我也建议在样品浓度相近处做标准曲线,这样结果反而更准一些。
原文由 xky0230699 发表: 建立一个液相色谱方法时,比如有一个标准曲线的浓度区间为一个数量级,即最高浓度是最低浓度的10倍,此时若想改用外标法,那取哪个浓度比较合适,峰面积是6位数好,还是7位数好。在药典中常常没有对仪器的灵敏度作出规定,那么同一个浓度,在不同的仪器上就可能出现峰面积相差好几倍的情况。 |
1、不同仪器的响应值(峰面积)没有可比性,计算的参数不一样,结果可能天差地远。
2、外标法适用的条件是——所有测定的物质浓度范围在其线性区间之内,最好是在区间的中部(30%-80%),比如你用1到10的浓度做标准曲线,所测定的结果在3到8之间最好。当然这仅仅是经验,实际上只要在范围内都可以的。
3、使用外标法不建议浓度区间太大,否则线性偏离的几率大增。
我曾经做过很多回收率,我觉得,当标准点超过3个点时,最好采用单点校正,选择与样品峰面积相当的标准点来做校正,这样比较准确点