要求:1.找出图谱中存在的问题(越多越好噢!)
2.图谱中一个主要问题是基线漂移(在图谱两端基线很平,中间峰却漂移的很大,最小漂移为50左右,最大的有150).
针对峰的漂移你有什么好的建议嘛?
3.如果要对图中的两个峰(图谱中峰1、峰2)进行含量测定,你觉得应该怎样改善条件才可以更好的进行定量分析.

1. 走梯度基线漂移是会有的，而且从你的图谱中看漂移也不是很明显，如果想改善，甲醇可以换成乙腈试试，不过成本会比较高。
2. 样品出峰的时候，最好不要在梯度变化的时候，这样重现性可能不太好，而且基线很可能处在上升或下降的过程，基线是倾斜的。我们一般是在样品出峰前几分钟前就将流动相稳定在某一比例，等出完峰再改。
3.柱温可以适当提高，在没有样品出峰的时候，有机相比例可以适当调高一些。
4.走梯度，如果只是要定量，不是要求指纹图谱的话，起始比例可以采用第一个所需的峰刚好和周围的峰分开时的流动相比例来定，等到第一个峰出完或者在出峰前改变有机相比例（就算改了有机相比例也不会影响到将要出的峰），比例至多少要根据你要的下面的化合物的性质等决定。原则上有机相改变的跨度要达到一个平衡：即下面峰的出峰时间长短、峰形好坏、梯度返回平衡的时间长短三者能够达到一个较好的平衡点。
5.如果要指纹图谱，而且用其中的一两个峰定量，那么走梯度还要尽量使每个峰分开。某些液相的工作站可以设定不同形式的梯度曲线（凹形和凸形），而不是直线形式改变梯度，使用的原则就是要使峰密集的地方流动相改变缓慢些，峰稀疏的地方流动相改变快些。
6.走中药一定要注意，因为中药中成分复杂，如果连续进样，为了防止有鬼峰出现，你最后的有机相比例最好设定高一些，并且走上一段时间，再回低有机相平衡。走完第一针，最好走一针空白溶剂，看看会不会有峰干扰你下面的进样。

下面再来看看你的梯度：
1.如果你不要指纹图谱，那么起始有机相的比例完全可以提高一些，只要能确保峰1和周围的峰分开就行。
2.峰1走完后可以迅速切换到峰2所需的比例，但是从图上看峰2似乎包裹了一个小峰，这时的有机相比例应该在摸索一下，最好能分开，流速也可以适当降低些。峰2出完后可以再迅速切换到下一个高些的有机相比例走上一段时间，让后面的峰尽快出尽。
3.最后你的梯度要回到起始比例，且平衡一段时间，我一般看柱压，柱压差不多和进样前一样就可以了。

原文由 03yx2 发表: 大家图谱来找茬(第二季) ◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆ 要求:1.找出图谱中存在的问题(越多越好噢!) 2.图谱中一个主要问题是基线漂移(在图谱两端基线很平,中间峰却漂移的很大,最小漂移为50左右,最大的有150). 针对峰的漂移你有什么好的建议嘛? 3.如果要对图中的两个峰(图谱中峰1、峰2)进行含量测定,你觉得应该怎样改善条件才可以更好的进行定量分析. 〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓 目的：研究某一个厂家注射液的指纹图谱。 色谱条件为:Eclipse XDB-C18（ODS-2，250×4.6 mm，5 μm）,甲醇-5％乙酸梯度洗脱,温度:25℃,检测波长:284nm;流速1.0ml/min.进样量:10ul. 检测样品：某厂复方注射剂. 梯度表如下： ◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇ 图谱如下:

首先要说的是你的这张图谱做的真的不敢恭维！好的指纹图谱是几乎每个峰都能基线分离的，大部分能定量，也叫定量指纹图谱。

看你的谱图你使用的仪器应该是岛津或者Agilent，岛津的可能性要大些，关键的问题以下有几个：
1、你的样品前处理有问题，溶剂噪音很大，最好改用流动相最初始比例的溶剂溶解，这样会消除2 min的溶剂峰
2、看你的色谱图和流动相，你使用的高效液相色谱仪检测器不适合这个样品指纹图谱分析，中药复杂成分的指纹图谱最好使用Waters的2996DAD检测器，含1024光电倍增管，而你使用的Agilent或是岛津的DAD对复杂成分紫外可见响应值有问题（我自己多次遇到这样的问题，最后对比上述三家公司仪器得出的结论），建议最好使用Watersd的2996DAD检测器。这样建议的；理由是该检测器在Empower工作站里很方便查看各色谱峰的紫外吸收，从而为指纹图谱的波长选择留下很大余地，换可以选择二维指纹图谱。
3、该色谱柱不适合该样品的指纹图谱，试试Agilent或luna的柱子
4、如楼上各家所见，有机流动相建议使用乙腈，背景噪音会小很多
5、流动相条件太复杂，考虑到重复性等，差不多2-4步梯度变化就可以了

注意了以上的这些后，再对各色谱峰进行流动相的梯度优化，然后就要靠经验了，需要的话可以联系我QQ332806956  niaimin215@163.com

1、分析周期较长，峰型欠佳，杂质峰较多
2、可能为初始比例平衡时间不够，建议梯度程序增加回到原比例的步骤。
也可能是杂质的影响，建议改进前处理方法。根据检测波长，排除流动相梯度变化造成的基线波动。
3、可加入三乙胺改善峰型。40min后增加甲醇比例缩短分析时间

1.分析运行时间较长：提高5~10，40~60分钟时间段的甲醇比例，当然也可以适当提高柱温。
2.基线的漂移，似乎在梯度中都存在，不易消除，但是可以利用工作站或仪器的背景扣除功能来改善图谱情况。
3.你是不是象前面几位所讲，可以在梯度结束时加一个恢复初始值设置，以便仪器稳定。
4.从图谱看，完全可以对峰1、2进行定量。不过，图谱中杂质峰较多，可以采用外标法或标准曲线法进行定量。

1.初始流动相的有机相可以稍微增大一点点
2.40~60min之间的流动相变化太慢，可以在40~50min将有机相的比例调节到稍微比40%大一点点。
3.50~60min之间可以将流动相调回到初始比例，这样进下一针不至于因为流动相的变化太大而导致仪器难平衡。最好是在梯度里加入一个后运行时间，就是用初始的流动相比例平衡几分钟效果会更佳
4.可以稍微升高一点柱温30~40度的柱子温度可能较合适！