回复lixiaohui012发表于:2008/8/27 10:56:52悬赏金额:
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最近在做土壤蛋白酶,可是做了几次提出来的待测液体在比色的时候总是茶色,不知道是为什么? 我是按照关松萌的土壤酶及其研究法上的茚三酮比色法做的,不知道问题到底出在哪里,希望大家能给我指点迷津,方便的话可以给我发邮件,我的邮箱是 xiaoyu589@163.com 谢谢啦!
原文由 lixiaohui012 发表: 我做的提取液有颜色,用水浴加热后还是茶色。问题到底出在哪里啊?请各位帮忙啊! |
你可以试一试用pH电极调一下溶液的pH值,调到显色的具体pH
请问一下,你们做蛋白酶的时候甘氨酸标准溶液稀释的是不是10倍?我稀释10倍沸水浴后怎么有的不变色啊?然后我稀释5倍,但是测出来的不成一天直线,真郁闷了,还有就是土样的大空白(就是不加土样的空白)怎么每次都比土样的高许多?那个小空白(就是有土样但是加水的空白)还可以,是不是哪里做错了,请教高手们帮我分析下哪里出错了,多谢了!~~~~~~~~~~~~
原文由 lixiaohui012 发表: 我说一下我操作的步骤,各位大侠们帮我找找问题到底出在哪里? 称取风干土4g,加1ml的甲苯15min后,再加入20ml的1%干酪素(干酪素是用PH 7.4的0.2M的磷酸盐缓冲液配制)在培养箱中30度下培养24h,培养结束后,再加入2ml 0.1N的硫酸和20%的硫酸钠溶液,再离心(6000转每分钟)15min,取上清液2ml,置于50ml的容量瓶中,加1ml茚三酮(2%的茚三酮,用丙酮配制),在沸水浴上水浴10min,将获的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。 我的问题现在就是水浴以后,溶液变为茶色,不知道是什么原因。茚三酮应该没有问题,因为标线可以做出来,麻烦各位帮我想想,到底问题出在哪里,你们都是怎么做的啊? |
氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用生成蓝紫色化合物,
可以考虑可能影响实验的步骤,
或者蛋白酶的含量太低了!增加土样量再测一测!!
原文由 lixiaohui012 发表: 多谢帮忙。但是应该不可能是茚三酮的问题,因为我标线做出来了啊。多谢 |
那可能是蛋白酶含量太低了。