回复wychtao发表于：2008/8/21 19:10:03悬赏金额：
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最近做梯度洗脱时，遇到比较头痛的问题，单进溶剂时基线漂移就比较厉害，甚至有很高的峰出来，如图，17min后没积分的即为基线中也有的峰。当时以为既然溶剂都有，就是空白了，在进样品时就没有积分。
但心里还是没底，请教各位高手，这种现象正常不？梯度洗脱基线漂移是正常，但在后面有峰出来还正常吗？会不会是系统里面残留的东西，或是样品没完全洗脱出来？还有能不能改善一下洗脱程序，使基线好看一些啊？问题比较多，见笑了。
洗脱程序如下：C18柱，A相甲醇，B相甲醇：水=5：95缓冲盐溶液
时间(min) 0 2 12 22 24 32
B%(V/V) 100 100 15 15 100 100
这种情况很正常，梯度洗脱随着有机相的增大，会将流动相中有机杂质洗脱出来产生空白峰；如果水相不是用超纯水（包括缓冲盐不是用色谱纯），有机相不是用进口的，则系统空白峰会很多、很大、很杂，影响样品分析结果。特别紫外检测波长较低时（如190-210nm左右），空白峰干扰很明显，且基线漂移也很大。因此，建议流动相尽可能使用超纯水（如Millipore），有机相用进口的，试剂用色谱纯或高纯，这些对梯度分析较好，更会延长色谱柱的使用寿命。
建议把甲醇换成乙腈,甲醇的截止波长约为230nm左右,你用的波长为210nm,这样肯定基线波动很大了;另外建议初使条件下平衡的时间长点,特别是在有缓冲盐的情况下.
楼主所说的进空白有峰,如果对结果没什么影响的话(对你所需要的峰无多大干扰),不管它就是了;
检测器如果有气泡的话,会产生较尖锐的峰.
四楼说的没错，而且梯度洗脱中甲醇比乙腈基线漂移更明显，特别是检测波长比较低的时候。梯度洗脱中如果用到缓冲盐，需要注意：随着流动相中有机相比例的增加，要保证缓冲盐不能有析出。
xy200609 回复于：2008/8/21 21:27:42
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