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共有 15 人回复了该问答最近实验室增购仪器帮忙提取、分离、测试有关寡糖的仪器有哪些
 回复qinshan1980发表于:2008/8/13 17:52:38悬赏金额:100积分 状态:已解决
最近实验室增购仪器帮忙提取、分离、测试有关寡糖的仪器有哪些
领导让我查下
我一时也不知道
着急中
希望大家帮忙
wangboxzzjs 回复于:2008/8/13 23:50:57
⑵电泳
   ①毛细管电泳(CE): 毛细管利用它进行寡糖的组成分析、纯度鉴定和结构电泳不仅仅是一种分离手段,糖化学家还可以归属[5]。它既可以对复杂寡糖进行直接分析,得到寡糖的微观不均一性的信息,又可以对寡糖的酶解产物进行定性和定量分析,从而得出寡糖链的完整结构。
   ②SDS-PAGE-PVDF技术:利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳-聚偏氟乙烯薄膜电迁移技术[6]可以把电泳凝胶上的糖蛋白基本上定量地转移到聚偏氟乙烯薄膜上,在此膜上可以直接进行酸水解,然后分析其氨基酸和糖基组成;也可以在此膜上进行溴化氰降解、各种蛋白酶、糖肽酶和糖苷酶水解,以及把PVDF膜直接置于蛋白质气相序列仪或质谱上进行序列分析,从而获得pmol级糖蛋白的肽链和糖链结构以及糖肽连接方式,其做法是首先将转移到PVDF膜上的蛋白质剪下,溶解后分成数个试样,再用酸水解确定所研究的蛋白质是否含有糖基和含有什么样的单糖组成,若是糖蛋白则可用糖苷酶,如PNGase、Endo H、Endo F2等对其进行酶解,又用HPAEC-PAD分析所得的寡糖链,从而推测出糖蛋白上的糖链结构。
   ③荧光基团辅助的糖电泳[7]:荧光基团辅助的糖电泳,又称荧光基团标记的糖的聚丙烯酰胺凝胶电泳,是一种寡糖结构分析的简便方法。它可以用来对多个样品平行地进行寡糖样品的简单、快速、灵敏和高分辨率的分离及定量分析。它是通过对糖类分子的还原端羰基进行荧光基团衍生化标记后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,这既增强了寡糖分子的检测灵敏度(<10~12 mol),又使通常呈中性的糖类分子带上电荷在电泳体系中进行分离。荧光试剂主要有两种:8-氨基萘基-1,3,6-三磺酸和2-氨基吖啶酮。分别用于中性与酸性寡糖的分离。因为疑胶电泳可以很方便地使用通常所用的蛋白质疑胶电泳设备和缓冲液体系(只要把沉淀剂SDS省去即可),而且在一次电泳时可以平行地进行多个寡糖样品的对照分离,所以它与酶解方法结合能非常方便、快捷和灵敏地对寡糖进行结构分析,这种方法与前面的CE方法有着异曲同工之妙,但所需仪器设备却更为简便。

  ⑶磁共振方法
  NMR技术对寡糖及其糖肽结构研究工作具有举足轻重的作用。尽管糖链中氢谱重叠十分严重,但500MHz或600MHz的高分辨1H-NMR能准确测定结构表征基团(structure reporter groups)的化学位移和峰宽,精度可达0.001。糖链的各种结构特征,均可由这些结构表征基团的微小位移变化出来,此外2D-NMR、NOE以及13C、15N、31P的NMR数据对糖链一级结构及其溶液构象的分析,也是必不可少的。对于N-连接的糖链,完备的ID-NMR数据库已经建立,并已成功地用于糖肽和糖蛋白上N-糖链的结构分析,最近Wyss等[8]又使用750MHz的核磁谱仪研究了人CD2中粘附域hsCD2105中肽链和糖链的结构,从而使人们首次测定了完整糖蛋白的溶液构象,并由此对其中糖链的作用机制进行了探讨。

  2、酶学方法

  在以前糖类结构的酶学方法中,人们通常采用的是一些外切糖苷酶对寡糖进行顺序消化以推测其化学结构,由于酶解的高度专一性和放射标记方法的引入使得这种方法十分有效并广为采用。但这种方法最大的缺陷在于酶解结束后需要很多次地进行分离和确定产物的流体动力学体积,试剂阵列分析方法(reagent array analysis method,RAAM)就是针对这种问题应运而生的[9]。它将酶解方法的操作简化为只要将纯化的寡糖样品等分成几个试样,再将每个试样与某种精确设定的外切糖苷酶混合物保温酶解,这种特定酶混合物就叫做试剂阵列(reagent array)。其原理是许多外切糖苷酶的混合物与糖链样品保温酶解,直至所有酶都无法断裂的连接点,称为终点片段("stop point" fragment)。通过省去其中一种或数种不同的外切糖苷酶所得的酶混合物再酶解糖链就会得到不同的终点片段。又因为放射性标记在糖链的还原端,所以检测时只有终点片段具有放射活性,而反应产物中释放的单糖则没有响应,合并每次酶水解的产物,再对产物库(pool of products)进行一次凝胶渗透色谱分离,把分离图谱与计算机数据库中的寡糖链模拟分离图谱进行对照即可确定样品是何种寡糖,根据这一原理,商品化的糖序列仪(glycpseqiemcer)也已被生产出来。但由于糖蛋白上O-连接糖链的高度复杂性和许多连接特异性的糖苷酶无法获得,因而这一方法目前只适用于结构规律较明确的N-糖链。

jzd1020 回复于:2008/8/18 14:59:50
原文由 qinshan1980 发表:
最近实验室增购仪器帮忙提取、分离、测试有关寡糖的仪器有哪些
领导让我查下
我一时也不知道
着急中
希望大家帮忙


请问斑竹究竟是做什么寡糖,毕竟寡糖那么多,果寡糖、木寡糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、水苏糖、龙胆糖,还是什么,目前我国主要的就有果寡糖、木寡糖、低聚异麦芽糖、水苏糖,几种,提取的方法需要你自己根据样品的成分来做,寡糖大多数不溶于无水乙醇,测试现在我国几个厂家都在用HPLC,但从国外的一些先进仪器来看,如果经费充足可以用近红外分析仪,离子迁移光谱仪。其中离子迁移光谱仪的分析速度可以提高近7倍,分析下限可以达到ng水平,而且也告别了液相用乙腈等危险流动相。
liss576 回复于:2008/8/22 20:03:46
忘了,再补充一点,呵呵。寡糖一般不溶于90%以上的乙醇。如果用水提醇沉法的话,可以用80%乙醇沉淀,这样沉淀基本为多糖,而上清为寡糖和糖苷类物质。上清浓缩后过大孔树脂就可以了。这样可以避免多糖的干扰。相对方便些。
ktts 回复于:2008/8/14 19:07:01
楼主可以根据6、7楼的方法结合自己实验室的实际,看看决定用什么方法做,然后再去买仪器
最好看看哪家实验室做这方面的,可以去学习一下
sharkwein 回复于:2008/8/14 15:14:46
楼上的说得好全面,楼主要选择好方法才行
 回复  1# ijingle  回复于:2008/8/13 19:13:43
没做过寡糖,不知道是不是分光法检测的。
手上有检测方法吗?
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