回复liujian132008发表于:2008/6/18 12:01:52悬赏金额:
20积分 状态:
已解决
急!
最近在做18氨基酸
查了一些资料,最后选择了异硫氰酸苯酯(PITC)衍生测18氨基酸
但遇到不少问题,希望得到大家帮助!
主要体现在丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸。。。。到脯氨酸不能很好的分离开,且峰形不好看理论板数不高,后面9个氨基酸又能很好的分离峰形好
不知道是那里出了问题?流动相还是衍生过程?
不知道你们能否提供一份成熟的方法,我好做下对比找到问题所在
在此感谢!
可发邮箱:liujian132008@yahoo.com.cn
也可以提供意见!大家一起讨论讨论。
邮件已发送,岛津柱子也可以做的,我试过,效果不错,流动相的PH不用调,你可以试试我的方法
原文由 xky0230699 发表: 用汉邦和月旭的柱做一下看看,我们都用这个,我们也是异硫氰酸苯酯(PITC)衍生的,进样3ul,从图谱上柱子原因的可能性比较大,最好把峰高低于5000的浓度提高一倍. |
能告诉我一下具体的操作步骤好吗?我的邮箱:luole1979@163.com.谢谢!!!
呵呵,不好意思呀,我现在已经离开那家公司了,现在没做了,具体步骤不知道了,我有空帮你问一下以前的同事.
原文由 liujian132008 发表: 我的色谱条件跟上面这位差不多呀! 只是梯度有差异,不同的色谱系统适有差异。 现在找不到好的解决方案,真是完完了哟!!! |
不要着急,静下心来仔细考虑一下,很多问题都在细节上
如果时间来来得及,你可以自己逐一摸索条件
异硫氰酸苯酯衍生法氨基酸的测定
条件 波长 254nm 流速1ml/min 柱温 36度
梯度控制表
时间 A% B%
0 100 0
5 95 5
13 95 5
14 93 7
20 88 12
25 77 23
35 67 33
38 25 75
40 25 75
40.1 0 100
45 0 100
46 100 0
60 100 0
A:0.1mol/l醋酸盐缓冲溶液(Ph6.5):乙腈=97:3
(醋酸钠用醋酸调PH)
B:乙腈:水=4:1
柱温36度 K-C18 250