回复liujian132008发表于：2008/6/18 12:01:52悬赏金额：
20积分 状态：
已解决
急！
最近在做18氨基酸
查了一些资料，最后选择了异硫氰酸苯酯（PITC）衍生测18氨基酸
但遇到不少问题，希望得到大家帮助！
主要体现在丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸。。。。到脯氨酸不能很好的分离开，且峰形不好看理论板数不高，后面9个氨基酸又能很好的分离峰形好
不知道是那里出了问题？流动相还是衍生过程？
不知道你们能否提供一份成熟的方法，我好做下对比找到问题所在
在此感谢！
可发邮箱：liujian132008@yahoo.com.cn
也可以提供意见！大家一起讨论讨论。
邮件已发送，岛津柱子也可以做的，我试过，效果不错，流动相的PH不用调，你可以试试我的方法
原文由 xky0230699 发表:
用汉邦和月旭的柱做一下看看，我们都用这个，我们也是异硫氰酸苯酯（PITC）衍生的，进样３ul，从图谱上柱子原因的可能性比较大，最好把峰高低于５０００的浓度提高一倍． |
能告诉我一下具体的操作步骤好吗？我的邮箱：luole1979@163.com.谢谢！！！
呵呵,不好意思呀,我现在已经离开那家公司了,现在没做了,具体步骤不知道了,我有空帮你问一下以前的同事.
原文由 liujian132008 发表:
我的色谱条件跟上面这位差不多呀！
只是梯度有差异，不同的色谱系统适有差异。
现在找不到好的解决方案，真是完完了哟！！！ |
不要着急，静下心来仔细考虑一下，很多问题都在细节上
如果时间来来得及，你可以自己逐一摸索条件
异硫氰酸苯酯衍生法氨基酸的测定
条件 波长 254nm 流速1ml/min 柱温 36度
梯度控制表
时间 A% B%
0 100 0
5 95 5
13 95 5
14 93 7
20 88 12
25 77 23
35 67 33
38 25 75
40 25 75
40.1 0 100
45 0 100
46 100 0
60 100 0
A：0.1mol/l醋酸盐缓冲溶液（Ph6.5）：乙腈=97：3
（醋酸钠用醋酸调PH）
B：乙腈：水=4：1
柱温36度 K-C18 250
huangqining 回复于：2008/6/19 16:38:35
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