回复happyjyl发表于:2008/6/11 13:40:53悬赏金额:
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借贵版人气问一个问题:测定样品中的杂质时,什么情况下不用杂质标准品做对照,而采取把样品稀释后做自身对照?能给出自己工作中具体例子的,给悬赏分。谢谢!
我说的是药品中的有关物质(生产过程中带来的有机杂质),无机杂质和残留溶剂不算。有关物质包括已知杂质和未知杂质,二者加起来是总杂质。
我在中国药典上见到过这样的方法:乙胺嘧啶的有关物质(05版CP第3页):取本品,加三氯甲烷-甲醇(9:1)制成每1ml中含20mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取适量,加同一溶剂稀释成每1ml中含50ug的溶液,作为对照溶液。照薄层色谱法检验,……供试品溶液如显杂质斑点,与对照溶液的主斑点比较,不得更深。
详见下面的帖子:
http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20070831/964769/
我在5楼举了几种情况,都是我翻译资料时遇到的。
药品审评中心的老师也发过相关的讨论,见下:
关于HPLC主成分自身对照法检查有关物质时检测波长确定的讨论
http://www.cde.org.cn/page/framelimit.cbs?ResName=dzkw
据说这种稀释后自身对照的方法应用得挺多,但我不知道为什么要这样用。
紫外检测器、二级管振列检测器、荧光检测器和示差检测器都是选择性检测器,响应值不仅与样品浓度有关系,还与产品结构有关系。
响应值就是检测器检测出来的数值,如峰高、峰面积等。
响应因子是单位浓度的响应值,只与结构有关系了。
两个物质的响应因子相比较,就得到通常的校正因子,这个常用,你应该知道,我们说两个响应因子相似,就默认为校正因子是1,因此自身对照其实就是跟内标法计算公式一样,而外标法其实也就是校正因子是1的内标法计算公式得来的,其原理都是相通的。
当杂质标准品难以获得的时候,而化学合成过程中杂质结构往往跟主产物是相似的,因此假设校正因子是1,采用主成分自身对照。如果有杂质标准品,可以把校正因子计算出来的,结果会更准确。
推荐你看一下中国药典二部附录V D 高校
液相色谱法 3 测定法中的,解释的更清楚。
原文由 happyjyl 发表:
原文由 duliuhui 发表: 简单的说,响应因子就是指1个物质,在某一条件下,在检测器检出时给出的信号大小(响应大小)。响应因子相似,即二组物质在同样条件下检出时的信号大小很相近。 |
那跟响应值有什么区别? |
个人看法,响应因子是指单位质量(浓度)物质在检测器上的响应值。
guest 回复于:2008/6/12 11:57:25
原文由 lianlxh 发表:
原文由 happyjyl 发表:
我也是在翻译资料时遇到的。就我看到的资料而言,测定杂质含量时有以下几种情况(假定已知的杂质是A和B,其它都是未知杂质。杂质A的限度为0.1%,杂质B的限度为0.2%,总杂质限度为1.0%。):
1.用对照溶液测定--用对照品和一定量的杂质A、杂质B制成对照溶液,使对照溶液中杂质A的含量为0.1%,杂质B的含量为0.2%。供试品溶液色谱图中杂质A和杂质B的峰面积不应超过对照溶液色谱峰中相应的峰面积。
2.用对照溶液的稀溶液测定--供试品溶液和对照溶液的含量都是25ug/ml,然后取1ml对照溶液,稀释成100ml,得到稀溶液。在供试品溶液色谱图中,不计主成分的峰,任何其它峰的峰面积之和不得超过稀溶液主峰的峰面积(1.0%)。我的问题是:(1)假设供试品溶液色谱图中,主成分的峰面积为X,溶剂的峰面积为Y,其它所有峰的峰面积之和为Z,为什么不直接用Z除以X以得到总杂质含量,而要用对照溶液的稀溶液呢?(2)为什么要先制成对照溶液再稀释,而不是直接制成含量为0.25ug/ml的对照溶液呢?是为了避免误差吗?
3.自身对照--取供试品溶液(溶液M)1ml,稀释成100ml(溶液N)。把溶液M和N分别进样。溶液M的色谱图中,不计主成分的峰,任何其它峰的峰面积之和不得超过溶液N色谱图中主峰的峰面积(1.0%)。
大学时没有好好学习,很多基本的东西没有搞清楚,所以现在拿上来请教。是不是在没有对照品的情况下才会用供试品自身做对照呢?
另外,你提到“标准品”。我记得在药典还是什么地方看到过:对于生物制品是叫“标准品”,其它都是叫“对照品”。
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我不是学习药学的,从分析化学的角度我通常会那么说。在上报新药的申报资料关于标准的部分,通常都是按照药典的要求那么做,但具体为什么不清楚。 所有的有关杂质通常都要按照那种格式来做和写资料。 |
我对这个问题的理解:
1.百分之一自身对照法 这种方法主要用于杂质与样品在一定波长下有相近的响应值。 需要大大增加供试液的浓度,使样品中的杂质能在仪器的灵敏度下被检测出来。由于供试液的浓度太高,此时的样品峰极可能是不在线性范围内的,因此配制1%浓度溶液。
2.纯度检查 直接用除溶剂峰和样品峰以外的所用杂质峰和,除以样品峰。
3.杂质对照 一般用在已知杂质量较大或已知杂质具有较强的毒性作用,这个时候将被要求单独控制杂质量。
单杂和总杂控制基本是对合成药物来说,微生物制品纯度、杂质达不到药典要求。对于已知杂质可以通过杂质对照品定量分析,不能确定的杂质只能定性分析,前提是总杂不能超过0.5%。
对于通过药理、药代对产品质量有影响的已知杂质就要做杂质自身对照,除非你确定这种杂质对产品质量没有影响,或为未知杂质,单杂不超过0.1%。
blued 回复于:2008/6/12 15:34:44
我记得在ICH Q2b中曾经看到过类似的提法,就是在标准品不可获得的情况下,采用自身对照的方法进行杂质的验证。