为什么测得的氨基酸总和一直偏高呢？
用柱前衍生化，测定16种氨基酸，氨基酸总和总比粗蛋白高，如果是样品前处理的问题，那问题应该是出在哪里呢？？酸水解时间的影响？目前是水解22小时，上机的样品瓶是用浓硝酸泡过，重复使用的，瓶盖隔垫也是重复使用的？这些会不会存在污染？
氨基酸总和比粗蛋白高的意思是这样的，打个比方说鱼粉中粗蛋白含量是60%，而氨基酸总和却达到70%，粗蛋白与氨基酸总和的比例关系是比较固定的，除了玉米蛋白粉等少数原料以外，基本是不会出现氨基酸总和高于粗蛋白含量的.
目前做了标样浓度梯度（100、150、200、250pmol/ul）和样品浓度稀释（2倍、4倍稀释）实验,结果显示标样的线性关系很好，上机样品液稀释后结果低于未稀释的，但是氨基酸总和高于粗蛋白含量的问题仍然存在？基本确定是样品前处理的问题，但是问题出在哪里呢？
我用的标样的溶剂是0.1M盐酸，而上机样品液溶剂是水，这个影响很大吗？？如果样品上机液溶剂改用盐酸或者流动相，哪个更好一点？

感谢大家提出的意见和建议

问题已经解决了，再次谢谢大家的意见